GLI-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420577
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GLI-3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico GLI-3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GLI-3 Anticorpo (B-4): sc-74478
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GLI-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420577 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Gli3 codifica a GLI-3, um fator de transcrição do tipo dedo de zinco que atua como ativador ou repressor dependente do contexto na sinalização Hedgehog, integrando sinais dos cílios primários para regular programas de expressão gênica do desenvolvimento. Em camundongos, a GLI-3 é essencial para o padrão de formação dos membros, do tubo neural e de estruturas craniofaciais, ao controlar as saídas transcricionais a jusante de PTCH1/SMO e modular a atividade da família GLI. O processamento proteolítico e a regulação pós-traducional da GLI-3 ajudam a estabelecer gradientes de morfógeno e a formação de fronteiras durante a embriogênese. A atividade desregulada de Gli3 está associada a fenótipos de malformações congênitas e é frequentemente usada como modelo para investigar a homeostase tecidual dependente de Hedgehog e a reprogramação oncogênica de vias de sinalização.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GLI-3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Gli3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Gli3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Gli3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GLI-3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Gli3 para a investigação da sinalização de GLI-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Gli3 críticos para a função GLI-3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Gli3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo GLI-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo GLI-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Gli3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo GLI-3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR GLI-3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Gli3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Gli3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.