Plásmido CRISPR de Activación (h) girdin: sc-402236-ACT

El gen humano CCDC88A codifica girdin, un gran andamiaje de unión a actina que integra la señalización de factores de crecimiento y de GPCR con la remodelación del citoesqueleto para coordinar la polaridad celular, la migración dirigida y la adhesión. Girdin actúa aguas abajo de PI3K–AKT e interactúa con proteínas G heterotriméricas y reguladores de la polaridad para influir en la formación de lamelipodios, el tráfico vesicular y la dinámica de la señalización de receptores. A través de estas funciones, CCDC88A contribuye a procesos como el crecimiento de neuritas y la organización epitelial, y la alteración de su expresión o del acoplamiento de su señalización se ha asociado con fenotipos anómalos de motilidad y supervivencia observados en el cáncer y en otros contextos de enfermedades proliferativas o del neurodesarrollo. Su conectividad en rutas lo convierte en un nodo útil para analizar cómo la arquitectura del citoesqueleto modula la transducción de señales y las transiciones de estado celular.

girdin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCDC88A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

girdin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCDC88A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCDC88A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de girdin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCDC88A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de girdin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía girdin en células tumorales con expresión de CCDC88A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.