Plasmide CRISPR d'Activation (h) girdin: sc-402236-ACT

Le gène humain **CCDC88A** code **girdin**, un grand échafaudage se liant à l’actine qui intègre les signalisations des facteurs de croissance et des **RCPG** (récepteurs couplés aux protéines G) avec le remodelage du cytosquelette afin de coordonner la polarité cellulaire, la migration dirigée et l’adhérence. Girdin agit en aval de la voie **PI3K–AKT** et interagit avec les protéines G hétérotrimériques ainsi qu’avec des régulateurs de la polarité pour influencer la formation des lamellipodes, le trafic vésiculaire et la dynamique de la signalisation des récepteurs. Par ces fonctions, **CCDC88A** contribue à des processus tels que l’extension des neurites et l’organisation épithéliale, et une expression ou un couplage de signalisation altérés ont été associés à des phénotypes anormaux de motilité et de survie observés dans le cancer et dans d’autres contextes de maladies prolifératives ou neurodéveloppementales. Sa connectivité au sein des voies de signalisation fait de **CCDC88A** un nœud utile pour analyser comment l’architecture du cytosquelette module la transduction du signal et les transitions d’état cellulaire.

girdin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCDC88A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

girdin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCDC88A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCDC88A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de girdin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCDC88A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de girdin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie girdin dans les cellules tumorales présentant une expression de CCDC88A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.