Particules Lentivirales d'Activation (m) ghrelin: sc-425542-LAC

Le gène murin **Ghrl** code la ghréline, une hormone peptidique d’origine gastrique qui transmet ses signaux via le récepteur sécrétagogue de l’hormone de croissance (GHSR) afin de réguler l’appétit, l’homéostasie énergétique, le métabolisme du glucose et des sorties neuroendocrines, notamment la libération d’hormone de croissance. La ghréline module les circuits hypothalamiques qui contrôlent le comportement alimentaire et interagit avec les processus de récompense, de stress et les rythmes circadiens, reliant l’état nutritionnel périphérique à la signalisation centrale. Les effets en aval incluent des modifications de la voie cAMP/PKA et, plus largement, des programmes transcriptionnels métaboliques dans le foie, le tissu adipeux et le muscle, avec des rôles supplémentaires dans la motilité gastro-intestinale et l’inflammation. Une dérégulation de la signalisation de la ghréline a été associée à des phénotypes liés à l’obésité et à la cachexie, à l’insulinorésistance et à une réactivité au stress altérée, faisant de **Ghrl** un point d’entrée pertinent pour étudier les voies métaboliques et neuroendocrines dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales ghrelin (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ghrl dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ghrelin (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ghrl, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ghrelin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ghrl ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.