ghrelin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425542-ACT

O gene **Ghrl** de camundongo codifica a **grelina**, um hormônio peptídico secretado, produzido principalmente no estômago, que sinaliza por meio do **receptor secretagogo do hormônio do crescimento** para coordenar o equilíbrio energético e a função neuroendócrina. A grelina regula o apetite, a adiposidade, a homeostase da glicose, a motilidade gastrointestinal e a liberação do hormônio do crescimento, integrando o estado metabólico periférico às redes de sinalização do hipotálamo e da hipófise. Processos a jusante se cruzam com o sensor de nutrientes dependente de AMPK e com circuitos que controlam recompensa, respostas ao estresse e inflamação. Alterações na sinalização da grelina têm sido associadas a fenótipos de obesidade e síndrome metabólica, bem como a caquexia, resistência à insulina e mudanças neurocomportamentais em modelos experimentais.

ghrelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ghrl sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ghrelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ghrl em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ghrl, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ghrelin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ghrl nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ghrelin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ghrelin em células tumorais com expressão de Ghrl silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.