GGCX Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407037

Descripción general

GGCX (carboxilasa gamma-glutamil) es una enzima de membrana del retículo endoplásmico que cataliza la γ-carboxilación de residuos de glutamato dependiente de vitamina K, generando dominios Gla necesarios para la unión de calcio. Esta modificación postraduccional es esencial para la maduración y la actividad de múltiples proteínas secretadas, incluidos los factores de coagulación y otras proteínas dependientes de vitamina K, lo que vincula a GGCX con la hemostasia, la función de proteínas extracelulares y el ciclo redox dentro de la vía de la vitamina K. La actividad de GGCX se entrecruza con el procesamiento de proteínas en el RE y el control de calidad de la vía secretora, porque una carboxilación adecuada influye en el plegamiento proteico y en la eficiencia de secreción. La alteración genética o funcional de GGCX se ha asociado con fenotipos hemorrágicos y con disfunción más amplia de proteínas dependientes de vitamina K, lo que la convierte en una diana útil para estudiar la biología relacionada con la coagulación y la regulación postraduccional vinculada al RE.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GGCX (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GGCX en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GGCX junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GGCX tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GGCX.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GGCX para la investigación de la señalización de GGCX, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GGCX críticos para la función de GGCX
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GGCX para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GGCX CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GGCX CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GGCX. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GGCX (h) y el plásmido HDR GGCX (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GGCX para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GGCX definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.