Plasmide CRISPR/Cas9 KO GGCX (h): sc-407037

Présentation

GGCX (γ‑glutamyl carboxylase) est une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse la γ‑carboxylation, dépendante de la vitamine K, de résidus glutamate, générant des domaines Gla nécessaires à la liaison du calcium. Cette modification post‑traductionnelle est indispensable à la maturation et à l’activité de nombreuses protéines sécrétées, notamment des facteurs de coagulation et d’autres protéines dépendantes de la vitamine K, reliant ainsi GGCX à l’hémostase, à la fonction des protéines extracellulaires et au cycle rédox au sein de la voie de la vitamine K. L’activité de GGCX s’articule également avec la maturation des protéines dans le RE et le contrôle qualité de la voie sécrétoire, car une carboxylation correcte influence le repliement des protéines et l’efficacité de leur sécrétion. Des altérations génétiques ou fonctionnelles de GGCX ont été associées à des phénotypes hémorragiques et, plus largement, à des dysfonctionnements des protéines dépendantes de la vitamine K, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la biologie liée à la coagulation et la régulation post‑traductionnelle associée au RE.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GGCX (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GGCX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GGCX, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GGCX à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GGCX.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GGCX pour l'étude de la signalisation de GGCX, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GGCX essentiels à la fonction de GGCX
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GGCX pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GGCX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GGCX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GGCX. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GGCX plasmide HDR (h) et le GGCX (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GGCX pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GGCX définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.