GFRαL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-415831

Übersicht

GFRAL (GDNF-Familienrezeptor alpha-ähnlich) kodiert einen über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankerten Co-Rezeptor, der der RET-Rezeptor-Tyrosinkinase Ligandenspezifität verleiht, insbesondere als Reaktion auf das Stresszytokin GDF15. Das GFRαL-abhängige RET-Signaling aktiviert nachgeschaltet die MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Signalwege, um zelluläre Antworten auf metabolische und entzündliche Reize zu regulieren, mit besonderer Bedeutung für die neuroendokrine Kontrolle der Energiebilanz. Die Expression ist in klar abgegrenzten Neuronenpopulationen des Hinterhirns angereichert und unterstützt damit Funktionen in der Nährstoffsensorik und der systemischen Homöostase. Eine Fehlregulation der GDF15–GFRαL–RET-Achse wurde mit kachexieähnlichen Phänotypen, Stoffwechselstörungen und krebsassoziierten systemischen Effekten in Verbindung gebracht, was GFRAL zu einem nützlichen Ziel für die Analyse dieses Signalwegs in krankheitsrelevanten Modellsystemen macht.

Das GFRαL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GFRAL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GFRAL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GFRAL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GFRαL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GFRAL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GFRαL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GFRAL-Exone abzielen, die für die GFRαL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GFRAL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GFRαL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GFRαL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GFRAL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GFRαL HDR-Plasmid (h) und GFRαL HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GFRAL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GFRAL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.