Plásmido Doble Nickase (h) GFAT1: sc-403022-NIC

GFPT1 codifica la glutamina:fructosa-6-fosfato amidotransferasa 1 (GFAT1), la enzima limitante de la velocidad de la vía biosintética de las hexosaminas, que convierte la fructosa-6-fosfato y la glutamina en glucosamina-6-fosfato. Al controlar el flujo hacia la producción de UDP-GlcNAc, GFAT1 influye en la N- y O-GlcNAcilación de proteínas, el control de calidad de proteínas en el retículo endoplásmico y la detección metabólica vinculada a la disponibilidad de glucosa y aminoácidos. Esta vía se interseca con la señalización de la insulina, las respuestas al estrés y la síntesis de glicoproteínas, situando a GFPT1 como un nodo clave que conecta el estado nutricional con las modificaciones postraduccionales y la homeostasis celular. Se ha asociado la actividad alterada de GFPT1 y la salida de la vía de las hexosaminas con el síndrome miasténico congénito y con una glicosilación desregulada y fenotipos metabólicos en contextos relevantes para enfermedades humanas.

GFAT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GFPT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GFPT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GFPT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GFPT1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.