Plasmide CRISPR/Cas9 KO GDPD3 (h): sc-405288

Présentation

GDPD3 (glycerophosphodiester phosphodiesterase domain containing 3) est une glycéro‑phosphodiestérase humaine impliquée dans le catabolisme des phospholipides et le remodelage des glycéro‑phospholipides, des processus qui façonnent la composition des membranes et la signalisation dérivée des lipides. En hydrolysant les glycérophosphodiesters, GDPD3 peut influencer les pools cellulaires de métabolites qui soutiennent le trafic membranaire, l’homéostasie des organites et, plus largement, les réseaux du métabolisme lipidique. Une régulation altérée du métabolisme des glycéro‑phospholipides est fréquemment associée à des modifications de la prolifération, de l’adaptation au stress et de la signalisation liée à l’immunité, faisant de GDPD3 un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur la reprogrammation métabolique. Des variations d’expression et d’activité d’enzymes lipidiques, dont GDPD3, ont été rapportées dans divers contextes pertinents pour les maladies, ce qui motive l’étude de sa contribution à une homéostasie lipidique dérégulée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GDPD3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GDPD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GDPD3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GDPD3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GDPD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GDPD3 pour l'étude de la signalisation de GDPD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GDPD3 essentiels à la fonction de GDPD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GDPD3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GDPD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GDPD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GDPD3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GDPD3 plasmide HDR (h) et le GDPD3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GDPD3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GDPD3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.