GDF-15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401430-ACT

O fator de diferenciação de crescimento 15 (GDF15) codifica o GDF-15, uma citocina secretada responsiva ao estresse da superfamília TGF-β, induzida por disfunção mitocondrial, hipóxia e sinais inflamatórios. O GDF-15 influencia programas de adaptação celular, incluindo respostas integradas ao estresse, remodelamento metabólico e regulação da atividade de células imunes, com efeitos a jusante sobre apoptose, proliferação e reparo tecidual. A expressão alterada de GDF-15 tem sido associada a distúrbios cardiometabólicos, sinalização de estresse associada ao câncer, neuroinflamação e estados inflamatórios sistêmicos, tornando-o um alvo útil para investigação de vias. Como fator circulante, ele também é utilizado para estudar a comunicação intercelular entre tecidos doentes e compartimentos imunes ou estromais.

GDF-15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GDF15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GDF-15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GDF15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GDF15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GDF-15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GDF15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GDF-15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GDF-15 em células tumorais com expressão de GDF15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.