GD3 synthase Double Nickase Plasmid (m): sc-422942-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GD3 synthase Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GD3 synthase Double-Nickase-Plasmid (m) und GD3 synthase Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf St8sia1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GD3 Synthase: sc-390123
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GD3 synthase Double Nickase Plasmid (m) | sc-422942-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GD3 synthase Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422942-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **St8sia1** kodiert die GD3-Synthase (ST8SIA1), eine α2,8-Sialyltransferase, die GM3 zu GD3 umsetzt und im Golgi-Apparat die Biosynthese der Ganglioside der b- und c-Reihe einleitet. Indem die GD3-Synthase die Gangliosidzusammensetzung an der Plasmamembran prägt, beeinflusst sie die Organisation von Lipid Rafts, die Rezeptorsignalgebung sowie nachgeschaltete Prozesse einschließlich Zelladhäsion, Migration und Differenzierung. Die Aktivität von St8sia1 liegt an der Schnittstelle zwischen Glycosphingolipidstoffwechsel sowie Immun- und neuronalen Signalwegen, in denen Ganglioside Antworten auf Wachstumsfaktoren und Zytokine modulieren. Veränderte Gangliosidprofile unter Beteiligung von GD3 wurden mit dysregulierter Signalübertragung und zellulären Stressprogrammen in neuroentwicklungsbezogenen und onkogenen Modellsystemen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur Membranglykosylierung unterstützt.
GD3 synthase Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des St8sia1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von St8sia1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die St8sia1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit St8sia1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.