Plasmide CRISPR/Cas9 KO GCSH (h): sc-406784

Présentation

GCSH code la protéine H du système de clivage de la glycine, un transporteur mitochondrial porteur de lipoate qui assure la navette des intermédiaires réactionnels entre la glycine décarboxylase (protéine P), l’aminométhyltransférase (protéine T) et la dihydrolipoamide déshydrogénase (protéine L). Au sein de ce complexe multi-enzymatique, GCSH soutient le catabolisme de la glycine et le métabolisme des unités monocarbonées en couplant la dégradation de la glycine au transfert d’unités carbonées dépendant des folates, reliant ainsi le renouvellement mitochondrial des acides aminés à l’homéostasie redox et métabolique cellulaire. Une perturbation de l’activité de clivage de la glycine est associée à une altération de la fonction mitochondriale et à un déséquilibre des flux glycine/sérine, des processus pertinents pour la dysrégulation neurométabolique. En tant que nœud reliant une enzymologie dépendante de la lipoate aux voies médiées par les folates, GCSH est fréquemment étudié dans le contexte du métabolisme mitochondrial, des réponses au stress oxydant et des erreurs innées du métabolisme affectant la gestion de la glycine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GCSH (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GCSH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GCSH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GCSH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GCSH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GCSH pour l'étude de la signalisation de GCSH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GCSH essentiels à la fonction de GCSH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GCSH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GCSH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GCSH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GCSH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GCSH plasmide HDR (h) et le GCSH (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GCSH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GCSH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.