Plásmido CRISPR de Activación (h) GCSFR: sc-402269-ACT

CSF3R codifica el receptor humano del factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSFR), un receptor de citocinas de clase I que controla el compromiso con el linaje neutrofílico, la diferenciación granulocítica y la supervivencia en células hematopoyéticas. La activación del receptor inducida por el ligando pone en marcha la señalización JAK/STAT —especialmente STAT3 y STAT5— y se integra con las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT para coordinar la proliferación y la maduración funcional. La desregulación de la señalización de CSF3R y las variantes del receptor se han asociado con alteraciones en la homeostasis de las células mieloides y una granulopoyesis aberrante, lo que hace que este eje sea relevante para estudios de programas de diferenciación mieloide y dinámica de células inflamatorias. Como receptor de superficie con salidas transcripcionales aguas abajo bien definidas, GCSFR es un nodo útil para el mapeo mecanístico de vías y el análisis de redes transcripcionales en modelos de investigación inmunológica y hematológica.

G-CSFR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CSF3R sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

G-CSFR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CSF3R en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CSF3R, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de G-CSFR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CSF3R y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de G-CSFR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía G-CSFR en células tumorales con expresión de CSF3R silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.