GCSFR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402269-ACT

CSF3R codifica il recettore umano del fattore stimolante le colonie di granulociti (GCSFR), un recettore di citochine di classe I che regola l’impegno di linea neutrofila, la differenziazione granulocitica e la sopravvivenza nelle cellule ematopoietiche. L’attivazione del recettore indotta dal ligando coinvolge la segnalazione JAK/STAT—soprattutto STAT3 e STAT5—e si interfaccia con le vie MAPK/ERK e PI3K/AKT per coordinare proliferazione e maturazione funzionale. La deregolazione della segnalazione di CSF3R e le varianti del recettore sono state associate ad alterazioni dell’omeostasi delle cellule mieloidi e a una granulopoiesi aberrante, rendendo questo asse rilevante per lo studio dei programmi di differenziamento mieloide e delle dinamiche delle cellule infiammatorie. In quanto recettore di superficie con output trascrizionali a valle ben definiti, GCSFR rappresenta un nodo utile per la mappatura meccanicistica delle vie di segnalazione e per analisi delle reti trascrizionali in modelli di ricerca immunologica ed ematologica.

G-CSFR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CSF3R senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

G-CSFR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CSF3R nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CSF3R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di G-CSFR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CSF3R nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da G-CSFR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via G-CSFR nelle cellule tumorali con espressione di CSF3R silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.