GCDH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405887

Übersicht

Das humane Gen **GCDH** codiert die Glutaryl‑CoA‑Dehydrogenase, ein mitochondriales Flavoprotein, das bei der Verwertung von Lysin, Hydroxylysin und Tryptophan die oxidative Decarboxylierung von Glutaryl‑CoA zu Crotonyl‑CoA katalysiert. Diese Reaktion verknüpft den Aminosäureabbau über einen FAD‑abhängigen Elektronentransfer mit dem mitochondrialen Energiestoffwechsel und der Redoxhomöostase. Die GCDH‑Aktivität beeinflusst das Gleichgewicht von Acyl‑CoA‑Spezies und organischen Säuren und prägt dadurch mitochondriale Stressantworten sowie metabolische Umprogrammierungen bei Nährstofffluktuationen. Funktionsverlust‑Varianten sind mit der Glutarazidurie Typ I assoziiert, und GCDH wird häufig im Zusammenhang mit neurometabolischer Vulnerabilität, mitochondrialer Dysfunktion und der Akkumulation organischer Säuren untersucht.

Das GCDH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GCDH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GCDH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GCDH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GCDH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GCDH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GCDH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GCDH-Exone abzielen, die für die GCDH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GCDH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GCDH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GCDH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GCDH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GCDH HDR-Plasmid (h) und GCDH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GCDH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GCDH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.