GCDFP-15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404430-ACT

PIP codifica a GCDFP-15 (proteína induzível por prolactina), uma glicoproteína secretada expressa de forma proeminente em epitélios associados a glândulas apócrinas e regulada pela sinalização de hormônios esteroides. A GCDFP-15 participa de interações proteicas no meio extracelular e é comumente utilizada como marcador molecular de estados de diferenciação epitelial, refletindo programas transcricionais ligados à responsividade hormonal. Seus padrões de expressão são frequentemente avaliados em estudos de mama e outros tecidos glandulares, nos quais níveis alterados de PIP/GCDFP-15 se correlacionam com mudanças na biologia de subtipos tumorais e em características de linhagem celular. Por ser um fator secretado, a GCDFP-15 também apoia investigações sobre sinalização no microambiente e leituras de vias associadas a biomarcadores.

GCDFP-15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GCDFP-15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GCDFP-15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GCDFP-15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GCDFP-15 em células tumorais com expressão de PIP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.