GBP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402792-ACT

A GBP3 humana (proteína ligante de guanilato 3) é uma GTPase grande induzível por interferon que sustenta a imunidade intrínseca celular ao modular respostas antimicrobianas e inflamatórias. A GBP3 participa de programas de sinalização de IFN-γ/STAT e pode influenciar vias de defesa do hospedeiro ligadas à restrição de patógenos, a processos associados ao inflamassoma e à remodelação transcricional impulsionada por citocinas. Alterações na expressão de GBP3 foram relatadas em condições mediadas pelo sistema imune e em múltiplos contextos de câncer, refletindo sua estreita relação com redes de genes estimulados por interferon e com interações entre tumor e sistema imune. Como resultado, a GBP3 é um nó útil para investigar circuitos responsivos a interferon, estados de ativação da imunidade inata e fenótipos transcricionais associados a estresse em células humanas.

GBP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GBP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GBP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GBP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GBP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GBP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GBP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GBP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GBP3 em células tumorais com expressão de GBP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.