GATA-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400396-ACT

GATA1 kodiert GATA-1, einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an GATA-Motive bindet und die Festlegung der erythroiden und megakaryozytären Zelllinie sowie die terminale Differenzierung steuert. Er reguliert Genprogramme, die die Hämoglobinsynthese, die Reifung von Erythrozyten, die Thrombozytenbildung und das Überleben kontrollieren, indem er mit Kofaktoren wie FOG1 und Komponenten der Chromatin-Remodellierungsmaschinerie zusammenwirkt. Die Aktivität von GATA-1 integriert Zytokin- und Entwicklungssignale, um in hämatopoetischen Vorläuferzellen den Übergang von Proliferation zu Differenzierung zu modulieren. Eine Fehlregulation oder Mutation von GATA1 ist mit aberranter Hämatopoese und Bluterkrankungen verbunden und macht es zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung von Lineage-Commitment und transkriptioneller Kontrolle in menschlichen Zellen.

GATA-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GATA1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GATA-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GATA1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GATA1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GATA-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GATA1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GATA-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GATA-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GATA1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.