Plásmido CRISPR de Activación (h) gamma Synuclein/SNCG: sc-401050-ACT

SNCG codifica la gamma-sinucleína, una pequeña proteína neuronal implicada en la función sináptica, la dinámica del citoesqueleto y el tráfico vesicular, con funciones más amplias en las respuestas celulares al estrés. En contextos no neuronales, la gamma-sinucleína se ha vinculado con la modulación de la estabilidad de los microtúbulos, la propensión a la agregación proteica y programas de señalización que influyen en la proliferación y la migración. Se ha informado de una expresión desregulada de SNCG en múltiples tipos de cáncer y con frecuencia se estudia como un marcador de progresión tumoral y potencial metastásico, a la vez que se relaciona con vías relevantes para la neurodegeneración. Estas características hacen de SNCG un nodo útil para analizar el control transcripcional, la proteostasis y las redes de señalización asociadas al citoesqueleto.

gamma Synuclein/SNCG El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNCG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

gamma Synuclein/SNCG El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNCG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNCG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de gamma Synuclein/SNCG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNCG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de gamma Synuclein/SNCG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía gamma Synuclein/SNCG en células tumorales con expresión de SNCG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.