GALC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401025

Übersicht

GALC kodiert die Galaktocerebrosidase, eine lysosomale Hydrolase, die Galaktolipide wie Galaktosylceramid und Psychosin abbaut und damit den Sphingolipid-Umsatz sowie die Homöostase der Myelinlipide unterstützt. Durch ihren Beitrag zum lysosomenabhängigen Recycling von Membranlipiden verknüpft GALC die Lysosomenfunktion mit übergeordneten Signal- und Stoffwechselwegen der Sphingolipid-Metabolisierung, zellulären Stressantworten und der neuroglialen Physiologie. Eine veränderte GALC-Aktivität ist mit einer gestörten Verarbeitung von Psychosin und einem aus dem Gleichgewicht geratenen, myelinbezogenen Lipidhaushalt assoziiert, was GALC für Studien zu Leukodystrophie-Mechanismen und lysosomengetriebenen neurodegenerativen Prozessen relevant macht. In menschlichen Zellen dient GALC als nützlicher Angriffspunkt, um zu untersuchen, wie lysosomaler Lipidabbau die Membranzusammensetzung, den intrazellulären Transport und die Zellviabilität beeinflusst.

Das GALC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GALC-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GALC-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GALC nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GALC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GALC-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GALC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GALC-Exone abzielen, die für die GALC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GALC-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GALC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GALC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GALC-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GALC HDR-Plasmid (h) und GALC HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GALC-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GALC-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.