Gab 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401108-ACT

O GAB1 humano codifica a Gab1, um adaptador de ancoragem (scaffold) que integra sinais de receptores tirosina-quinase e de receptores de citocinas para coordenar cascatas a jusante que controlam proliferação, sobrevivência, migração e diferenciação. Após fosforilação em tirosina, a Gab1 recruta efetores com domínio SH2, como PTPN11/SHP2 e a subunidade p85 da PI3K, conectando receptores a montante às vias de sinalização MAPK/ERK e PI3K–AKT e a processos associados do citoesqueleto e do tráfego vesicular. A sinalização dependente de Gab1 contribui para a regulação da morfogênese epitelial, a ativação de células imunes e as respostas a fatores de crescimento. A expressão ou fosforilação desregulada de GAB1 tem sido associada à saída aberrante de vias de RTK observada em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de vias e redes.

Gab 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GAB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gab 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GAB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GAB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gab 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GAB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gab 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gab 1 em células tumorais com expressão de GAB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.