Particules Lentivirales d'Activation (m) G9a: sc-430994-LAC

Le gène murin *Ehmt2* code la lysine méthyltransférase G9a (EHMT2), l’un des principaux enzymes « writers » des marques H3K9me1/2, qui favorisent la formation d’hétérochromatine facultative et une répression génique stable. G9a coordonne des programmes de silençage épigénétique qui façonnent l’engagement de lignée, le développement embryonnaire et le maintien de l’identité cellulaire, via des interactions avec la méthylation de l’ADN et des complexes de remodelage de la chromatine. En régulant des réseaux transcriptionnels liés au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à l’état métabolique, *Ehmt2* influence diverses voies nucléaires qui gouvernent la différenciation et l’adaptation au stress. Une activité de G9a dérégulée et des profils de méthylation de H3K9 altérés sont fréquemment étudiés dans des contextes de reprogrammation transcriptionnelle oncogénique, de modifications de l’expression génique associées à la fibrose et de phénotypes neurodéveloppementaux dans des systèmes modèles.

Les particules d'activation lentivirales G9a (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ehmt2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales G9a (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ehmt2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de G9a. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ehmt2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.