G9a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402484-ACT

EHMT2 codifica a metiltransferase humana de lisina em histonas G9a, um dos principais “writers” das marcas H3K9me1/2, que promovem heterocromatina facultativa e repressão transcricional. A G9a coopera com a GLP, proteínas HP1 e a maquinaria de metilação do DNA para moldar a acessibilidade da cromatina e estabilizar programas de expressão gênica específicos de linhagem durante o desenvolvimento e a diferenciação. Por meio da regulação do controle do ciclo celular, das respostas a danos no DNA e de redes transcricionais metabólicas e inflamatórias, o EHMT2 influencia múltiplas vias de sinalização ligadas à homeostase epigenética. A atividade desregulada de G9a e padrões alterados de metilação de H3K9 têm sido associados à biologia tumoral, a fenótipos do neurodesenvolvimento e à remodelação transcricional relacionada ao sistema imune, reforçando sua relevância para modelagem mecanística de doenças.

G9a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EHMT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

G9a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EHMT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EHMT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de G9a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EHMT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de G9a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via G9a em células tumorais com expressão de EHMT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.