G6PD Lentiviral Activation Particles (h): sc-401019-LAC

Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase (G6PD) ist das geschwindigkeitsbestimmende Enzym des oxidativen Zweigs des Pentosephosphatwegs und erzeugt NADPH, das für die Reduktion von Glutathion, die Entgiftung reaktiver Sauerstoffspezies und die Aufrechterhaltung der Redox-Homöostase benötigt wird. In menschlichen Zellen unterstützt die G6PD-Aktivität den biosynthetischen Stoffwechsel, indem sie Ribose-5-phosphat für die Nukleotidsynthese sowie Reduktionsäquivalente für den Lipid- und Stickstoffmonoxidstoffwechsel bereitstellt. Störungen der G6PD-Expression oder der Enzymaktivität beeinflussen die Anfälligkeit für oxidativen Stress, die Mitochondrienfunktion und die metabolische Reprogrammierung. Ein G6PD-Mangel ist eine häufige erbliche Enzymopathie mit hämatologischer Empfindlichkeit gegenüber oxidativen Belastungen; zudem wird eine veränderte G6PD-Regulation in Zusammenhängen wie Entzündung, Infektionsbiologie und Krebsstoffwechsel untersucht.

G6PD Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente G6PD-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

G6PD Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der G6PD-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen G6PD-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen G6PD-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.