Plasmide CRISPR d'Activation (h) G3PP/PGP: sc-402332-ACT

La PGP humaine, également connue sous le nom de G3PP (phosphatase du glycérol-3-phosphate), code une phosphatase cytosolique qui hydrolyse le glycérol-3-phosphate en glycérol, reliant ainsi le métabolisme des glycérolipides au flux glycolytique et à l’homéostasie redox. En modulant la disponibilité du glycérol-3-phosphate, G3PP/PGP influence la synthèse des triglycérides, la navette du glycérol phosphate et la réoxydation mitochondriale du NADH, façonnant ainsi les réponses cellulaires à l’excès de nutriments et au stress oxydatif. Ce contrôle métabolique est pertinent pour les études portant sur la sécrétion et la sensibilité à l’insuline, la lipotoxicité et l’équilibre énergétique dans le foie, le tissu adipeux, le muscle squelettique et les cellules bêta pancréatiques. Une gestion dérégulée des glycérolipides et la pression redox associées à l’activité de G3PP/PGP sont fréquemment étudiées dans le contexte du syndrome métabolique, de l’inflammation liée à l’obésité et des dysfonctionnements cellulaires associés au diabète.

G3PP/PGP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PGP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

G3PP/PGP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PGP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PGP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de G3PP/PGP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PGP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de G3PP/PGP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie G3PP/PGP dans les cellules tumorales présentant une expression de PGP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.