Plásmido Doble Nickase (h) Gα i-1/GNAI1: sc-400652-NIC

GNAI1 codifica la subunidad alfa inhibitoria de la proteína G, Gαi-1, un componente central de las proteínas G heterotriméricas que transducen señales desde los GPCR hacia efectores aguas abajo. Tras la activación del receptor, Gαi-1 suprime la actividad de la adenilil ciclasa para reducir los niveles de AMPc y modula la función de los canales iónicos y la señalización por quinasas, incluidos nodos de las vías PI3K/AKT y MAPK, a través de las salidas tanto de Gα como de Gβγ. Estos programas de señalización regulan la proliferación, la diferenciación, la secreción y la migración quimiotáctica en muchos tipos celulares. El acoplamiento desregulado GPCR–proteína G y la señalización dependiente de AMPc alterada se han implicado en la reprogramación de la señalización asociada al cáncer, en respuestas inflamatorias y en fenotipos neurológicos, lo que convierte a GNAI1 en un objetivo útil para el análisis de vías.

Gα i-1/GNAI1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GNAI1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GNAI1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GNAI1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GNAI1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.