FXYD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406431

Descripción general

FXYD3 (dysadherina) es un miembro de la familia FXYD de pequeñas proteínas de membrana de paso único que modulan la actividad de la Na⁺/K⁺-ATPasa, influyendo así en la homeostasis iónica, el potencial de membrana y la fisiología del transporte epitelial. Mediante la regulación de la cinética de la bomba y los efectos posteriores sobre el volumen celular y la señalización, FXYD3 puede afectar procesos como la proliferación, las respuestas al estrés y la dinámica de la adhesión célula–célula. Se ha informado de una expresión alterada de FXYD3 en múltiples contextos de cáncer y con frecuencia se estudia por sus posibles vínculos con la motilidad, la invasividad y los cambios del estado epitelial de las células tumorales. Como regulador asociado a la superficie, también es relevante para investigaciones sobre redes de proteínas de membrana y vías acopladas a la Na⁺/K⁺-ATPasa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FXYD3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FXYD3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FXYD3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FXYD3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FXYD3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FXYD3 para la investigación de la señalización de FXYD3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FXYD3 críticos para la función de FXYD3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FXYD3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FXYD3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FXYD3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FXYD3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FXYD3 (h) y el plásmido HDR FXYD3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FXYD3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FXYD3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.