Plasmide Double Nickase (m) FUS/TLS: sc-433326-NIC

Fus code pour la protéine de liaison à l’ARN FUS/TLS, un facteur majoritairement nucléaire qui coordonne plusieurs étapes de l’expression génique, notamment la régulation transcriptionnelle, l’épissage du pré-ARNm, le transport de l’ARNm et la dynamique des granules de stress. FUS/TLS participe aux réponses aux dommages de l’ADN et au maintien du génome via des interactions avec la machinerie de réparation et des complexes associés à la chromatine, reliant ainsi le traitement de l’ARN à l’homéostasie cellulaire. Une altération de la fonction de FUS/TLS modifie le métabolisme neuronal des ARN et la protéostasie, et sa localisation aberrante ou son agrégation ont été largement impliquées dans la neurodégénérescence, faisant de Fus une cible clé pour les études mécanistiques de la biologie de l’ARN dans le système nerveux. Dans des modèles murins, la perturbation de Fus constitue un système exploitable pour analyser les réseaux de régulation de l’ARN et les voies liées à la réparation de l’ADN, aux réponses au stress et aux phénotypes neurodégénératifs.

FUS/TLS Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fus dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fus. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fus. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fus.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.