fumarate hydratase Lentiviral Activation Particles (h): sc-401660-LAC

Das menschliche FH-Gen kodiert die Fumarathydratase, ein mitochondriales Enzym, das im Tricarbonsäurezyklus (TCA-Zyklus) die reversible Hydratisierung von Fumarat zu L‑Malat katalysiert und damit den oxidativen Stoffwechsel mit dem zellulären Redoxgleichgewicht verknüpft. Die FH-Aktivität unterstützt die Anaplerose, die NADH-Produktion sowie die Koordination der mitochondrialen Funktion mit zytosolischen Stoffwechselprogrammen. Eine Störung von FH kann zu einer Anreicherung von Fumarat führen, die Hypoxiesignale, epigenetische Regulation und Stressantwort-Signalwege über veränderte Aktivitäten metabolitabhängiger Enzyme beeinflusst. Daher wird FH intensiv im Kontext metabolischer Umprogrammierung und Tumorbiologie untersucht, ebenso wie in Modellen erblicher Stoffwechselerkrankungen, die die Energiehomöostase betreffen.

fumarate hydratase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente FH-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

fumarate hydratase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der FH-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen fumarate hydratase-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen FH-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.