FOXN1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401498-ACT

FOXN1 (forkhead box N1) kodiert einen Transkriptionsfaktor der Forkhead-Familie, der für die Differenzierung thymischer Epithelzellen und die Aufrechterhaltung eines funktionellen thymischen Mikromilieus, das die T‑Zell-Entwicklung unterstützt, essenziell ist. In epithelialen Kompartimenten reguliert FOXN1 Programme, die die Keratinozytenreifung und die Festlegung epithelialer Zelllinien steuern, und verknüpft damit chromatinregulierte Transkription mit der Gewebehomöostase. Eine veränderte FOXN1-Aktivität wurde mit Immundefizienz-Phänotypen in Verbindung gebracht, die durch eine beeinträchtigte Thymopoese bedingt sind, ebenso wie mit Defekten der epithelialen Barriere und Differenzierung. Als linienbestimmender Regulator wird FOXN1 широко zur Untersuchung von Transkriptionsnetzwerken eingesetzt, die die Thymus-Organogenese, den Epithel–Immun-Crosstalk und die entwicklungsbezogene Genregulation steuern.

FOXN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOXN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOXN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOXN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOXN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOXN1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOXN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOXN1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOXN1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOXN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.