Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXI1: sc-408728-ACT

FOXI1 code un facteur de transcription de la famille forkhead box qui régule les programmes de différenciation épithéliale et de transport ionique, avec des rôles importants dans l’oreille interne et le canal collecteur rénal. En contrôlant des réseaux transcriptionnels liés à la sécrétion de protons et à l’homéostasie électrolytique, FOXI1 influence l’équilibre acido-basique et l’identité des cellules épithéliales. Une activité altérée de FOXI1 a été associée à des anomalies du développement affectant l’audition et la fonction tubulaire rénale, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier le contrôle transcriptionnel de la physiologie épithéliale. FOXI1 est également utilisé comme marqueur et régulateur dans des études de spécification de lignée et d’organogenèse.

FOXI1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXI1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXI1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXI1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXI1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXI1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXI1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXI1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXI1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXI1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.