FOG-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401361-ACT

ZFPM2 kodiert den „Friend of GATA-2“ (FOG-2), einen multi-Zinkfinger-Transkriptions-Koregulator, der an Faktoren der GATA-Familie bindet und so linien-/gewebespezifische Genexpressionsprogramme mitgestaltet. In menschlichen Zellen moduliert FOG-2 die transkriptionelle Aktivierung und Repression, indem es mit Chromatin-Remodeling- und Corepressor-Komplexen zusammenwirkt und dadurch Entwicklungs- und Differenzierungsprozesse beeinflusst. Diese regulatorische Achse ist an der Organogenese und der Festlegung des Zellschicksals beteiligt; eine veränderte ZFPM2/FOG-2-Aktivität wird in krankheitsrelevanten Kontexten wie angeborenen Herzfehlern und der Tumorbiologie mit fehlregulierten Transkriptionsnetzwerken in Verbindung gebracht. Als zentraler Kofaktor in GATA-gesteuerten Schaltkreisen wird FOG-2 häufig untersucht, um zu verstehen, wie Transkriptionsfaktor-Partnerschaften den epigenetischen Zustand und nachgeschaltete Signaloutputs feinabstimmen.

FOG-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZFPM2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOG-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZFPM2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZFPM2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOG-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZFPM2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOG-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOG-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZFPM2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.