Fnk CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419717

Übersicht

Das Mausgen *Plk3* kodiert die Serin/Threonin-Kinase Fnk, ein Mitglied der Polo-like-Kinase-Familie, das an stressresponsiver Signalübertragung und der Kontrolle des Zellzyklus beteiligt ist. Fnk wirkt an der Checkpoint-Regulation mit und moduliert über phosphorylierungsabhängige Signalnetzwerke Signalwege, die mit DNA-Schadensantworten, Apoptose und Proliferation verknüpft sind. Eine veränderte PLK3/Fnk-Aktivität wurde mit einer dysregulierten mitotischen Progression und Phänotypen der Genomstabilität in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und die Gewebehomöostase relevant sind. Diese Eigenschaften machen *Plk3* zu einem nützlichen Ziel, um kinasegesteuerte Signalübertragung, Stressanpassung und Entscheidungen über das Zellschicksal in Säugetier-Modellsystemen zu untersuchen.

Das Fnk CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Plk3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Plk3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Plk3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Fnk-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Plk3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Fnk-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Plk3-Exone abzielen, die für die Fnk-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Plk3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Fnk CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Fnk CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Plk3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Fnk HDR-Plasmid (m) und Fnk HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Plk3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Plk3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.