FMO3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406605

Descripción general

FMO3 codifica la monooxigenasa 3 que contiene flavina (FMO3), una monooxigenasa microsomal dependiente de NADPH con alta actividad en el hígado humano, que cataliza la N‑oxigenación y la S‑oxigenación de diversos xenobióticos y aminas endógenas. Al convertir la trimetilamina (TMA) en N‑óxido de trimetilamina (TMAO), FMO3 vincula el metabolismo de nutrientes de la dieta con la bioquímica redox hepática y los perfiles sistémicos de metabolitos. La actividad de FMO3 contribuye a la capacidad de desintoxicación e influye en la señalización mediada por metabolitos mediante interacciones con redes más amplias de biotransformación de fase I/fase II. La alteración genética o funcional de FMO3 se asocia con cambios en la oxidación de aminas, incluida la trimetilaminuria, y se estudia con frecuencia en el contexto de la variación interindividual en el metabolismo de fármacos y la modulación de rasgos metabólicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FMO3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FMO3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FMO3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FMO3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FMO3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FMO3 para la investigación de la señalización de FMO3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FMO3 críticos para la función de FMO3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FMO3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FMO3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FMO3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FMO3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FMO3 (h) y el plásmido HDR FMO3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FMO3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FMO3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.