Plasmide CRISPR d'Activation (h) Flt-1/VEGFR1: sc-400330-ACT

FLT1 code Flt-1/VEGFR1, une tyrosine kinase réceptrice à haute affinité pour le VEGF-A, le VEGF-B et le facteur de croissance placentaire, qui module la disponibilité des ligands et l’intensité du signal dans les lignées endothéliales et myéloïdes. VEGFR1 participe à l’angiogenèse, à la perméabilité vasculaire, à la migration endothéliale et au recrutement des cellules inflammatoires via des voies incluant PI3K–AKT, MAPK/ERK et une signalisation dépendante de PLCγ. Les isoformes de VEGFR1, à la fois membranaires et solubles, façonnent les gradients de VEGF et la maturation des vaisseaux, reliant la régulation de FLT1 aux réponses à l’hypoxie et au remodelage tissulaire. Une signalisation FLT1/VEGFR1 dérégulée a été associée à la néovascularisation pathologique et à la dysfonction vasculaire observées dans la biologie des cancers, les contextes ischémiques et les maladies inflammatoires, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur le vasculaire et le microenvironnement.

Flt-1/VEGFR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FLT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Flt-1/VEGFR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FLT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FLT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Flt-1/VEGFR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FLT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Flt-1/VEGFR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Flt-1/VEGFR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FLT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.