Plásmido CRISPR de Activación (h) Flotillin-1: sc-400736-ACT

FLOT1 codifica flotilina-1, una proteína andamiaje asociada a la membrana, enriquecida en balsas lipídicas y microdominios similares a caveolas, que coordina la agrupación de receptores, la endocitosis y la transducción de señales en la membrana plasmática. La flotilina-1 contribuye a la organización del citoesqueleto y al tráfico vesicular, influyendo en procesos como la adhesión, la migración y el recambio de receptores de membrana. Interactúa con vías que incluyen la señalización de receptores tirosina quinasa, la dinámica de la señalización MAPK/ERK y rutas endocíticas independientes de clatrina que moldean las respuestas celulares posteriores. La alteración de la expresión o la localización de FLOT1 se ha vinculado con una señalización y un tráfico de membrana desregulados observados en diversos contextos de investigación de enfermedades, incluida la biología del cáncer y la neurobiología.

Flotillin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FLOT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Flotillin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FLOT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FLOT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Flotillin-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FLOT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Flotillin-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Flotillin-1 en células tumorales con expresión de FLOT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.