Plásmido Doble Nickase (h) Flk-1/KDR/VEGFR2: sc-400118-NIC

KDR codifica la tirosina cinasa receptora Flk-1/KDR/VEGFR2, un receptor de señalización principal para los ligandos de VEGF en las células endoteliales vasculares. La dimerización inducida por el ligando y la autofosforilación activan las vías PI3K–AKT, RAS–RAF–MEK–ERK, PLCγ–PKC y de la familia SRC para coordinar la proliferación, migración y supervivencia endotelial, así como la permeabilidad vascular durante la angiogénesis y la vasculogénesis. La señalización de VEGFR2 también se integra con la producción de óxido nítrico y con programas de remodelación del citoesqueleto que determinan la maduración y la gemación de los vasos. La actividad y la expresión desreguladas de KDR se estudian ampliamente en la angiogénesis tumoral, en las respuestas neovasculares asociadas a la isquemia y en la remodelación vascular inflamatoria.

Flk-1/KDR/VEGFR2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KDR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KDR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KDR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KDR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.