Particules Lentivirales d'Activation (h) FKHRL1/FOXO3a: sc-400308-LAC

FOXO3 (FKHRL1/FOXO3a) est un facteur de transcription de la famille forkhead box O qui coordonne les décisions de destinée cellulaire en régulant des gènes impliqués dans l’apoptose, l’arrêt du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, la résistance au stress oxydatif et l’autophagie. Son activité est étroitement contrôlée par des modifications post-traductionnelles en aval de la signalisation PI3K–AKT, qui modulent la localisation nucléaire de FOXO3 et son activité transcriptionnelle, et il intègre également des signaux issus des voies AMPK et des sirtuines en situation de stress métabolique. Les programmes dépendants de FOXO3 influencent l’homéostasie immunitaire, le maintien des cellules souches/progénitrices et la sénescence cellulaire, reliant ainsi ce facteur à des phénotypes associés au vieillissement. Une signalisation FOXO3 dérégulée a été impliquée dans la biologie tumorale et la résistance au stress, ainsi que dans les mécanismes des maladies cardiométaboliques et neurodégénératives via l’altération de réseaux transcriptionnels de réponse au stress.

Les particules d'activation lentivirales FKHRL1/FOXO3a (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FOXO3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FKHRL1/FOXO3a (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FOXO3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FKHRL1/FOXO3a. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FOXO3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.