Plasmide Double Nickase (m) FJX1: sc-420360-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) FJX1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FJX1 Double Nickase (m) et le plasmide FJX1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Fjx1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) FJX1 | sc-420360-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Fjx1* code four-jointed box 1 (FJX1), une protéine conservée associée à l’appareil de Golgi, impliquée dans la régulation de la polarité planaire des cellules et la morphogenèse tissulaire. FJX1 est lié à des voies contrôlant la croissance et la mise en place des patrons, notamment via la modulation des effecteurs de la signalisation Hippo et des interactions avec des processus apparentés à Wnt/PCP qui influencent la prolifération cellulaire et l’organisation directionnelle. Au cours du développement, *Fjx1* contribue à une coordination des comportements épithéliaux et au façonnage des organes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des programmes de différenciation et du contrôle morphogénétique. Une expression dérégulée de FJX1 a été associée à des altérations du contrôle de la croissance et à des phénotypes migratoires dans des contextes pathologiques, ce qui étaye son intérêt comme nœud mécanistique pour l’étude des voies de signalisation et de l’architecture tissulaire.
FJX1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fjx1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fjx1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fjx1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fjx1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.