FIP1L1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413438

Visão geral

FIP1L1 codifica uma subunidade central do complexo fator de especificidade de clivagem e poliadenilação (CPSF), que ajuda a definir os sítios de processamento da extremidade 3′ em pré-mRNAs e coordena a adição da cauda poli(A). Por meio de interações com fatores de poliadenilação e com a maquinaria de processamento acoplada à RNA polimerase II, a FIP1L1 contribui para a maturação dos transcritos, sua estabilidade e programas regulados de expressão gênica. A alteração da função de FIP1L1 é relevante para a desregulação do processamento de RNA e tem sido implicada na biologia de neoplasias hematológicas, notadamente por meio do rearranjo FIP1L1–PDGFRA observado em certas neoplasias mieloides. Como resultado, a FIP1L1 é frequentemente estudada em vias que conectam a formação da extremidade 3′ do mRNA à proliferação celular, diferenciação e respostas transcricionais ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FIP1L1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FIP1L1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FIP1L1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FIP1L1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FIP1L1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FIP1L1 para a investigação da sinalização de FIP1L1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FIP1L1 críticos para a função FIP1L1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FIP1L1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FIP1L1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo FIP1L1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FIP1L1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FIP1L1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR FIP1L1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FIP1L1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FIP1L1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.