Filamin 1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400557-LAC

O FLNA humano codifica a filamina 1, um arcabouço de ligação à actina que entrecruza redes de F-actina e conecta o citoesqueleto a recetores de membrana, moldando assim a arquitetura celular, a adesão e a mecanotransdução. A filamina 1 coordena a sinalização através de integrinas e complexos de adesão focal e modula vias que regulam a migração celular, a endocitose e a remodelação do citoesqueleto, incluindo dinâmicas dependentes de GTPases da família Rho. Por meio destas interações, o FLNA influencia o desenvolvimento dos tecidos e a integridade vascular, sendo estudado em contextos como perturbações da migração neuronal, fenótipos do tecido conjuntivo e invasão de células tumorais, nos quais a remodelação da actina e a sinalização por recetores se encontram alteradas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Filamin 1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de FLNA numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Filamin 1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição FLNA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Filamin 1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo FLNA e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.