Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401754

Übersicht

FBLN1 kodiert Fibulin-1, ein sezerniertes extrazelluläres Matrix-Glykoprotein, das mit Basalmembranen und elastinfaserreichen Matrices assoziiert ist und so die Gewebearchitektur sowie die Zell-Matrix-Kommunikation unterstützt. Fibulin-1 interagiert mit mehreren ECM-Komponenten und beeinflusst dadurch Zelladhäsion, Migration und Mechanotransduktion, indem es die Organisation der Matrix mit Signalprogrammen verknüpft, die Proliferation und Differenzierung regulieren. Über diese Funktionen trägt FBLN1 zur Homöostase von Gefäß- und Bindegewebe bei und wird häufig in Umbaukontexten untersucht, etwa bei Fibrose, entzündungsassoziierten stromalen Veränderungen und der Entwicklung des Tumormikromilieus. Eine veränderte Expression oder Ablagerung von Fibulin-1 wurde in zahlreichen kardiovaskulären und onkologischen Studien beschrieben, was mechanistische Arbeiten zu ECM-getriebenen Phänotypen und matrixabhängiger Signalübertragung motiviert.

Das Fibulin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FBLN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FBLN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FBLN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Fibulin-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FBLN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Fibulin-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FBLN1-Exone abzielen, die für die Fibulin-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FBLN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Fibulin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Fibulin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FBLN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Fibulin-1 HDR-Plasmid (h) und Fibulin-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FBLN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FBLN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.