FHL-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403541-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FHL-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FHL-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und FHL-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FHL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FHL-1: sc-374246
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FHL-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403541-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FHL-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403541-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FHL1 kodiert das Four-and-a-half-LIM-Domains-Protein 1 (FHL-1), einen ausschließlich LIM-haltigen Adapter, der als Gerüstprotein Proteinkomplexe organisiert, die die Zytoskelettorganisation, die Mechanotransduktion und transkriptionelle Antworten in quergestreifter Muskulatur steuern. FHL-1 lokalisiert an fokalen Adhäsionen, sarkomerischen Strukturen und im Zellkern, wo es Signalausgänge aus integrin-gekoppelten Signalwegen und stressresponsiven Kinasekaskaden moduliert, die die Muskeldifferenzierung und das Remodeling prägen. Durch die Koordination von Interaktionen zwischen Strukturproteinen und transkriptionellen Regulatoren trägt FHL-1 dazu bei, die Muskelintegrität und die kontraktile Funktion aufrechtzuerhalten. Eine Fehlregulation von FHL1 ist mit erblichen Myopathien und kardiomyopathischen Phänotypen assoziiert und macht es zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung von Mechanismen von Muskelerkrankungen sowie von Genotyp-Phänotyp-Beziehungen.
FHL-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FHL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FHL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FHL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FHL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.