Plasmide CRISPR d'Activation (h) FGF-10: sc-417825-ACT

FGF10 code le facteur de croissance des fibroblastes 10 (FGF‑10), un ligand paracrine sécrété qui signale principalement via FGFR2b afin de réguler les interactions épithélio‑mésenchymateuses durant l’organogenèse et l’homéostasie des tissus adultes. FGF‑10 active les voies canoniques des récepteurs à activité tyrosine kinase, notamment RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ, pour contrôler la prolifération, la migration, la survie et la morphogenèse par bourgeonnement. Une dérégulation de la signalisation FGF10–FGFR2b a été impliquée dans un développement anormal des poumons et des glandes, une réparation des plaies déficiente et des programmes de croissance épithéliale altérés, pertinents pour les troubles congénitaux et la biologie des cancers. En tant que morphogène du développement et facteur de niche, FGF‑10 est couramment étudié dans l’épithélium des voies aériennes, la biologie des glandes mammaires et salivaires, ainsi que dans des modèles de signalisation stroma‑épithélium.

FGF-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FGF10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FGF-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FGF10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FGF10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FGF-10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FGF10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FGF-10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FGF-10 dans les cellules tumorales présentant une expression de FGF10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.