FEM1B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420316

Panoramica

Fem1b codifica FEM1B, una proteina conservata contenente ripetizioni di anchirina, coinvolta nella proteostasi dipendente dall’ubiquitina e nelle risposte cellulari allo stress. FEM1B è stata collegata al riconoscimento dei substrati nelle vie delle ligasi E3 dell’ubiquitina e contribuisce alla regolazione dell’apoptosi e di processi associati al ciclo cellulare, con effetti a valle sull’omeostasi mitocondriale e sulla segnalazione metabolica. Nei sistemi murini, la funzione di Fem1b è stata studiata in contesti che includono il bilancio energetico, la regolazione endocrina e il mantenimento dei tessuti, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla disfunzione metabolica e sui fenotipi di adattamento allo stress. Un’alterata attività di FEM1B è stata inoltre associata a cambiamenti nelle reti di controllo della qualità delle proteine, che possono influenzare la suscettibilità a modelli di malattie degenerative e metaboliche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FEM1B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fem1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fem1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fem1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FEM1B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fem1b per lo studio della segnalazione di FEM1B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fem1b critici per la funzione di FEM1B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fem1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FEM1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FEM1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fem1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FEM1B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FEM1B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fem1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fem1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.