FDX1L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426948

Descripción general

Fdx1l codifica la ferredoxina 1-like (FDX1L), una proteína de la familia de las ferredoxinas mitocondriales implicada en reacciones de transferencia de electrones que sostienen el equilibrio redox mitocondrial y el metabolismo oxidativo. Al transportar electrones hacia enzimas mitocondriales, FDX1L está en posición de influir en vías relacionadas con el mantenimiento de los clústeres hierro-azufre, reacciones esteroidogénicas o asociadas al hemo, y una homeostasis mitocondrial más amplia. La alteración de procesos mitocondriales dependientes de ferredoxinas puede modificar el manejo de especies reactivas de oxígeno, la flexibilidad metabólica y las respuestas al estrés, lo que hace que Fdx1l sea relevante para estudios de disfunción mitocondrial. En sistemas de ratón, Fdx1l ofrece un punto de estudio manejable para investigar cómo la transferencia de electrones mitocondrial se integra con el metabolismo celular y con fenotipos relevantes para enfermedad impulsados por una actividad mitocondrial deteriorada.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FDX1L (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fdx1l en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fdx1l junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fdx1l tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FDX1L.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fdx1l para la investigación de la señalización de FDX1L, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fdx1l críticos para la función de FDX1L
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fdx1l para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FDX1L CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FDX1L CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fdx1l. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FDX1L (m) y el plásmido HDR FDX1L (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fdx1l para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fdx1l definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.