Plasmide Double Nickase (h) FAS: sc-400481-NIC

FAS (CD95/TNFRSF6) code un récepteur de mort qui déclenche l'apoptose extrinsèque lors de la liaison du ligand Fas, entraînant l'assemblage du DISC avec FADD et l'activation de la caspase-8. Cet axe de signalisation s'intègre à l'amplification mitochondriale via BID et interfère avec les voies NF-κB et MAPK afin de coordonner l'homéostasie immunitaire, la tolérance périphérique et l'élimination des lymphocytes activés. Les perturbations de la signalisation FAS sont associées à un défaut de mort cellulaire induite par l'activation et à une lymphoprolifération, et des altérations de la régulation de FAS ont été observées dans de nombreux cancers et contextes inflammatoires. En tant que récepteur membranaire fortement connecté à de multiples voies, FAS est fréquemment étudié pour analyser les seuils d'apoptose, la sélection des cellules immunitaires et les mécanismes de résistance à la mort cellulaire.

FAS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FAS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FAS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FAS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FAS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.