FAM35A Plasmide Double Nickase (h2): sc-416298-NIC-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAM35A Plasmide Double Nickase (h2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAM35A Double Nickase Plasmid (h2) e il FAM35A Double Nickase Plasmid (h22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FAM35A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAM35A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416298-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano FAM35A codifica una proteina nucleare implicata nel mantenimento del genoma, in quanto modula la scelta della via di riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA e influenza la resezione delle estremità nei siti di danno; è stato associato al controllo della ricombinazione omologa e a un’interazione funzionale con le reti di riparazione legate a BRCA1/BRCA2, con effetti sulle risposte cellulari allo stress replicativo e agli insulti genotossici. Un’attività o un’espressione alterata di FAM35A è associata a fenotipi di instabilità genomica ed è stata osservata in contesti rilevanti per la biologia del cancro e per stati caratterizzati da difetti di riparazione del DNA. I reagenti per FAM35A supportano studi meccanicistici della segnalazione del danno al DNA, screening di perturbazione basati su CRISPR e la profilazione delle dipendenze dalle vie di riparazione mediante saggi per la formazione di foci di RAD51, marcatori di resezione delle estremità e dinamica delle forcelle di replicazione.
FAM35A Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FAM35A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FAM35A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FAM35A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FAM35A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.