FADS6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-435879

Übersicht

Fettsäure-Desaturase 6 (FADS6) ist ein membranassoziiertes Enzym, das an der Einführung von Doppelbindungen in mehrfach ungesättigte Fettsäuren beteiligt ist und dadurch die Lipidzusammensetzung sowie nachgelagerte Lipid-Signalwege beeinflusst. Indem FADS6 Pools bioaktiver Fettsäuren und ihrer Derivate formt, kann es in Maus-Zellen und -Geweben die Membranfluidität, die Organellenfunktion und die metabolische Homöostase beeinflussen. Die mit Fads6 verknüpfte Aktivität greift in umfassendere Netzwerke der Fettsäure-Desaturierung und -Elongation ein, die Energiebalance und die Verfügbarkeit entzündungsmodulierender Mediatoren koordinieren. Eine Fehlregulation desaturase-gekoppelter Lipidwege wird in präklinischen Modellen häufig im Kontext von metabolischem Stress, hepatischer Lipidakkumulation, lipidabhängigen Anforderungen der Neuroentwicklung und entzündlichen Phänotypen untersucht.

Das FADS6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fads6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fads6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fads6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FADS6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fads6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FADS6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fads6-Exone abzielen, die für die FADS6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fads6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FADS6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FADS6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fads6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FADS6 HDR-Plasmid (m) und FADS6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fads6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fads6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.