Plasmide Double Nickase (h) FAAH: sc-402470-NIC

L’hydrolase des amides d’acides gras (FAAH) est une hydrolase à sérine associée aux membranes qui met fin à la signalisation en hydrolysant des endocannabinoïdes tels que l’anandamide et des N‑acyléthanolamines apparentées. En contrôlant la disponibilité des ligands pour les récepteurs cannabinoïdes et d’autres voies sensibles aux lipides, la FAAH influence la transmission synaptique, la signalisation neuro‑inflammatoire, le traitement nociceptif et l’homéostasie métabolique. L’activité de la FAAH est étroitement liée au renouvellement des médiateurs lipidiques au niveau du réticulum endoplasmique et s’articule avec des réseaux plus larges impliquant l’acide arachidonique et les eicosanoïdes. Une expression ou une activité dérégulée de la FAAH a été étudiée dans le contexte de la biologie de la douleur, de phénotypes liés à l’anxiété, de comportements de consommation de substances, ainsi que de troubles inflammatoires ou métaboliques, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation lipidique.

FAAH Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FAAH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FAAH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FAAH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FAAH.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.