Plásmido CRISPR de Activación (h) EYA4: sc-404355-ACT

EYA4 codifica un miembro de la familia Eyes Absent (EYA) que actúa como coactivador transcripcional y fosfatasa, integrando programas de transcripción del desarrollo con la regulación del destino celular en respuesta a señales. EYA4 participa en redes reguladoras de genes que influyen en la diferenciación, la organogénesis y el mantenimiento de los sistemas sensoriales, y puede acoplarse a vías que controlan la salida transcripcional nuclear y la señalización sensible al estrés. En la biología humana, la actividad o expresión alterada de EYA4 se ha asociado con fenotipos relacionados con la función auditiva y la miocardiopatía, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudiar mecanismos de homeostasis tisular y disfunción. Los investigadores suelen estudiar EYA4 para comprender cómo los cofactores transcripcionales y las actividades fosfatasa coordinan la expresión génica específica de linaje y la adaptación celular.

EYA4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EYA4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EYA4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EYA4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EYA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EYA4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EYA4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EYA4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EYA4 en células tumorales con expresión de EYA4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.