Plásmido CRISPR de Activación (h) EY-cadherin: sc-401988-ACT

CDH18 codifica la EY-cadherina, una molécula de adhesión célula–célula dependiente de calcio de la superfamilia de las cadherinas que sostiene la arquitectura tisular al promover la formación de uniones adherentes y una clasificación celular coordinada. A través de su enlace con las cateninas y el citoesqueleto de actina, la EY-cadherina puede influir en la inhibición por contacto, en programas de cohesión de tipo epitelial y en redes de señalización que se entrecruzan con la dinámica de la β-catenina y otros reguladores de las uniones. La expresión alterada o la adhesión mediada por cadherinas desregulada se asocia con cambios en la migración celular, el estado de diferenciación y el comportamiento invasivo observados en múltiples contextos patológicos. Por ello, CDH18 se estudia con frecuencia en modelos que examinan la señalización dependiente de la adhesión, la morfogénesis y las transiciones de identidad celular.

EY-cadherin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDH18 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EY-cadherin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDH18 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDH18, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EY-cadherin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDH18 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EY-cadherin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EY-cadherin en células tumorales con expresión de CDH18 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.